細胞培養培地に関するよくある質問

1. 細胞に適した培地を選ぶにはどうすればいいですか?

主な参考文献: 特定の細胞株を樹立するために使用した培地が、通常は第一選択となります。関連文献を参照するか、細胞供給業者にご相談ください。
細胞の種類と実験に基づいて:
- マウス細胞株は、多くの場合、 RPMI1640.
- 細胞交雑、遺伝子導入実験、 IMDM 選択できます。
経験的手法（推奨）: 複数の培地タイプで細胞を培養し、成長曲線や培養効率などの指標を使用して結果を比較し、最適な培地を選択します。
信頼できるデータベースを参照してください: 当学校区の ATCC（アメリカタイプカルチャーコレクション） このウェブサイトでは、推奨される培地、条件、関連文献など、ほとんどの細胞株に関する詳細な培養情報を提供しています。

2. 液体培地は -20°C で保存できますか?

いいえ。 -20℃で保存すると、培地中の塩分が沈殿する可能性があります。解凍後、これらの塩分は完全に再溶解せず、浸透圧の低下につながる可能性があります。その結果、細胞が破裂し、死滅する可能性があります。

3. 新しく調製した液体培地はどれくらい保存できますか?

4. 血清と抗生物質を添加した培地は長期保存できますか?

5. 冷蔵庫に保存した培地が暗赤色（アルカリ性）に変わるのはなぜですか？

4℃で保存した場合、 CO₂が徐々に漏れ出す 培地からpHが上昇（アルカリ性が高まる）します。pH指示薬は フェノールレッド アルカリ性条件下では濃い赤紫色に変わります。
解決策： pHは泡立てることで調整できる フィルター滅菌CO₂ 使用前に培地に通してください。

6. 培地に抗生物質を添加する必要がありますか?

一般的には推奨されません。 微妙な汚染を隠したり、細胞に細胞毒性効果を与えたりすることを避けるため、通常の培養には抗生物質を添加しないでください。
例外： 細菌や真菌による汚染を防ぐため、 ペニシリン-ストレプトマイシン（ペニシリン-ストレプトマイシン） 添加可能です。一般的な最終濃度は、ペニシリン100 U/mL、ストレプトマイシン100 µg/mLです。

7. 無血清培養では抗生物質の濃度を調整する必要がありますか?

はい、量を減らしてください。 抗生物質の濃度は、 少なくとも50％ 血清含有培地で使用される濃度と比較して。血清タンパク質は一部の抗生物質に結合して不活性化しますが、この不活性化は血清を含まない条件では起こりません。

8. 一部の実験ではフェノールレッドを含まない培地が必要なのはなぜですか?

主な理由は XNUMX つあります。
1. ホルモンの影響: フェノールレッドはステロイドホルモン（特にエストロゲン）の効果を模倣し、ホルモン感受性細胞を使用した実験を妨害する可能性があります。
2. 検出の妨害: フェノールレッドの蛍光特性は、フローサイトメトリーなどの検出方法に干渉する可能性があります。

9. 共通培地成分の機能は何ですか?

NaHCO₃（炭酸水素ナトリウム）: CO₂と緩衝システムを形成し、インキュベーター内のpHを安定させます。
ピルビン酸ナトリウム: 細胞の代替炭素源として働く（グルコースが少ない場合）。一般的な最終濃度は 1mM.
ヘペス: 特にCO₂インキュベーター環境外でpHをさらに安定化させる強力な化学緩衝液。一般的な最終濃度は 25mM.
フェノールレッド: として機能します pH指示薬 (赤 = 中性 ~7.4、黄色 = 酸性、紫 = アルカリ性)。
L-グルタミン: 細胞にとって必須のアミノ酸で、エネルギー代謝とタンパク質合成に関与しています。 溶液中で不安定 冷凍保存しなければならない -20°C通常は使用直前に培地に添加されます。一般的な最終濃度は 2mMグルタミンを添加した培地は、4℃でXNUMX℃以上保存した場合は、再添加する必要がある。 2週間.