ポリメラーゼ連鎖反応、一般的な PCR 酵素

PCR (ポリメラーゼ連鎖反応) は、in vitro で DNA 分子を増幅するために一般的に使用される技術であり、PCR 酵素はこの反応の重要な要素です。 PCR 酵素の主な種類には、Taq ポリメラーゼ、Pfu ポリメラーゼ、Taq のホットスタート バリアントなどがあります。 DNAポリメラーゼ.

Taqポリメラーゼ

Taq ポリメラーゼは、広く使用されるようになった最初の PCR 酵素の 3 つです。 Thermus aquaticus という細菌から分離されたもので、耐熱性に優れています。 Taq ポリメラーゼは高温でも安定であり、PCR の変性、アニーリング、および伸長ステップに適しています。 ただし、Taq ポリメラーゼには 5'-XNUMX' 外核形成補正機能がないため、GC 含有量が高い領域ではエラー率が高くなります。

Pfu ポリメラーゼ

Pfu ポリメラーゼは好熱性シアノバクテリアから分離され、Taq ポリメラーゼに比べて耐熱性に優れています。 3'-5'エキソヌクレオチド補正機能を備えているため、GC含有率の高い領域を増幅する際にエラー率が低く、より正確な増幅産物を生成します。

Taq DNA ポリメラーゼのホットスタート バリアント

Taq ポリメラーゼは高温で活性化する必要があるため、PCR 反応の開始時に非特異的産物が生成される可能性があります。 この問題を克服するために、低温では不活性で高温では活性化可能な変異体を含むホットスタート PCR 酵素が導入されました。 これにより、PCR 反応の初期段階での非特異的産物の生成が減少し、特異性が向上します。

Taq ポリメラーゼは高温で活性化する必要があるため、PCR 反応の開始時に非特異的産物が生成される可能性があります。 この問題を克服するために、低温では不活性で高温では活性化可能な変異体を含むホットスタート PCR 酵素が導入されました。 これにより、PCR 反応の初期段階での非特異的産物の生成が減少し、特異性が向上します。