PCR ラボでのエアロゾル汚染を防ぐ方法

PCR (ポリメラーゼ連鎖反応) 技術の応用と開発は、疾患診断のためのより効果的な証拠につながりました。特に、蛍光定量的 PCR の促進と応用により、検査の感度と精度が大幅に向上しました。 しかし、この技術が病原体検出ラボで広く使用されるようになると、PCR ラボでのエアロゾル汚染の問題が徐々に懸念されてきました。 PCR ラボの DNA / RNA エアロゾル汚染を効果的に回避し、安定した信頼できるテスト結果を取得し、偽陽性を防止するために、PCR ラボは厳密な汚染防止対策を確立し、対応する汚染監視システムを確立して、エアロゾル汚染を防止します。汚染問題の原因と対応する解決策を迅速に見つけるため。

研究所のゾーニング

PCR ラボは、関連する規則に従って、試薬調製セクション、検体調製セクション、PCR 増幅セクション、および生成物分析セクションの XNUMX つのセクションに分割する必要があります。最初の XNUMX つのセクションは前増幅セクションであり、最後の XNUMX つのセクションは増幅セクションです。ポスト増幅セクション。 増幅前の領域と増幅後の領域は厳密に分離し、セクション間の圧力差を形成するために換気と浄化を装備する必要があります。 実験材料、試薬、記録紙、ペン、洗浄剤などを含むワークフローは、増幅前ゾーンから増幅後ゾーン、つまり試薬調製ゾーン→検体処理ゾーン→増幅ゾーン→製品のみに流れます。逆方向に流してはならない。 空気の流れが作業方向と同じになるように、各セクション、対応するバッファールーム、およびクリーンコリドーの間に異なる勾配圧力差を形成しながら、クリーンコリドーの流れを逆にすることは固く禁じられています。

コントロールの設定

XNUMX つのネガティブ コントロール (どちらもテンプレートとして水を使用し、XNUMX つは核酸抽出に関与するサンプルを使用し、もう XNUMX つは抽出に関与しないサンプルで、増幅システムを構成するときにのみ追加されます) は、監視するために実験を行う前に毎回準備されます。実験室でのエアロゾル汚染を調べ、汚染の有無とその原因を特定し、それを防止および排除するための措置を講じることができます。 実験結果の信頼性と精度を監視するために、陽性対照も設定する必要があります。

実験室エアロゾルのモニタリング

実験室の空気は、家庭用空気清浄機を使用して定期的に浄化され、空気中のエアロゾルの汚染に遅れないようにするために、浄水器内のフィルターを水に浸して混合し、混合水を対応するテストのサンプルとして使用します。 実験器具の汚染を理解するために、ピペットガン、抽出器、増幅器、およびその他の検査用器具の内部および表面から綿棒のサンプルを定期的に収集します。

厳格なワークフロー

PCRの各セクションには、色で区別できる独自の作業服が装備されており、各セクションに入るときに対応する作業服を着替える必要があります。 一方、きれいな廊下の入り口には、入るときに履き替える必要がある PCR 室専用の靴が設置されており、各セクションの前にはフェルト マットが設置されています。 清潔な廊下の検査員は、試薬調製エリアの方向から結果分析エリアの方向にのみ行くことができ、条件が許せば、各セクションの担当者を避けるために、各セクションには異なる操作担当者が配置されています。お互いに動き回ります。

洗浄と消毒の強化

実験室の適切な洗浄と消毒は、実験室でのエアロゾル汚染を防ぐ効果的な方法です。 実験室の清掃の範囲には、作業面（テストベンチ、ウルトラクリーンベンチ、保管キャビネットなど）、機器および機器の表面（遠心分離機の回転ヘッド、DNA 抽出用の加熱ブロック、増幅器のサンプルスロット、ピペット）の清掃が含まれます。ピペッティング用ロッド、遺伝子分析装置のスパイク スロットなど)、再利用されたツールや調理器具など。

実験開始の前後に、上記の領域と器具の表面を、新しく調製した 10% 次亜塩素酸ナトリウム溶液で繰り返し拭き、75% エタノールでこすり洗いして残留物を除去します。アルコールが蒸発しました。 これにより、表面に付着したさまざまな汚染物質を効果的に除去できます。 同時に、実験室は定期的に紫外線照射による消毒を行っています。